谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸,其活力大小可以反映机体硒水平。硒是GSH-Px酶系的组成成分,它能催化GSH变为GSSG,使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物,从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害,NADPH的减少量则和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关
。
1. 血清、血浆样本收集:应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆避免使用溶血,高血脂标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明。
细胞培养液、上清样品收集:取细胞培养上清液 500ul,4 度,6000rpm 离心 5-10min;取上清。
组织样品收集:将组织块用 PBS 漂洗干净,制成匀浆液,4 度离心(3500r/min, 30min) 取上清液。待测样本应尽早检测,2-8℃保存 48 小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
2. 标准品/样品稀释液(1×)的配置:1ml 标准品/样品稀释液(10×)+9ml 去离子水。
3. 标准品配制:取 8 个 1.5ml 离心管,分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,每管中各加入标准品/样品稀释液(1×)100ul,第一管 S1 中再加入标准品(5mg/ml)100ul,置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸 100ul,移至第二管,如此反复作对倍稀释,从第七管(S7)中吸出 100ul 弃去,第八管为空白对照。标准曲线浓度为: 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39、0 ug/ml 。
4. 样品的准备:取和检测样品相同数量的 1.5ml 离心管并编号,每管中分别加入对应检测样品100ul。
5. 如果您检测的样本中 靶蛋白浓度 高于标准品最高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。
1. 加提取液:将配置/分装好的标准品及待测样品放入 1.5ml 离心管架(1.5ml 双面板)上,每管中分别各加入提取液 100ul,震荡混匀后,室温静置 10 分钟。
2. 加显色液:每孔加入显色液 400ul,混匀后室温静置反应 10 分钟,将反应好的样品,8000 转离
心 1 分钟,取上清 100ul 对应加入微孔板中,(如检测样品澄清也可以不离心,直接取上清)。
3. 加 GSH 还原酶:在加好标准品及样品的微孔板中,每孔再加入 GSH 还原酶 100ul,混匀后室温静置反应 5 分钟。
4. 读 数:将反应好的微孔板 30 分钟内用酶标仪在 412nm 处读 OD 值。
1. 请自备 1.5ml 离心管及离心管架、水浴锅等常规检测设备及仪器。
2. 检测时所有试剂都要恢复到室温,试剂盒开封后剩余试剂放回袋中 1 个月内用完。
3. 实验前请认真仔细阅读此说明书,说明书以试剂盒内纸质版为准。
4. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!