1.血清、血K样本收集应使用一次性的无热原，天内体素试管(EDTA、柠情到盐、肝素抗凝均可），血清、血资避免使用洛血，高血脂标本，标本悬呼枷应离心去除，使标本湾激透明。待测样本应尽早检测，2-8C保存48小时;更长时间须冷冻（-20℃或-80°℃)保存，避免反复冻融。
     ⒉.洗涤液配置︰用蒸馏水1:20稀释（例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水)
     3标准品配制∶取8个1.5m漓心管，分别标注S1.2S3$4$556,S.,bankh第一管S1中加入标生品/佯品稀释波90ul ,第二至第八管中分别加入标相品/样县稀释液20ul ,在第一管中加人(标佳的提高高j度NXmmol以标准品溶液10u1置于漩泯混合器上混匀后用加样器吸出20u ，移至第二管，如比反复作对倍稀释，从第七管中吸出20u弃去，第八管为空白对照。标准曲线浓度为2、1、05.0.25,0.13.0.5.0.3,0 molA标准品的月量及标准曲线范围也可根据自己需要配置)。
     4.生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。5.TMB显色液的配置∶使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1∶1混合，避光放置备用。
     6.如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

1.加样∶空白孔加入50ul标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。2洗板∶用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350ul，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。
     3.空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1*的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。4.洗板︰同上。
     5.每孔加入SABC复合物工作液10Oul，混匀后置37℃，20分钟。6.洗板︰同上。
     7.每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37℃暗处反应10-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。8.每孔加入10Oul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

1.所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔OD低于0.1，也可以直接计算。
     2.以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

1、灵敏度:可测浓度小于0.0062mol/L。
     2、特异性:同时可检测重组或天然的牛SHBG，不与牛其它细胞因子有交叉反应。3、重复性:板内，板间变异系数均小于10%。
     

1.在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。
     ⒉洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。3.检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中1个月内用完。
     4.试剂盒使用超敏TMB溶液，显色过深时会出现沉淀状，属正常现象，混匀即可，不影响结果判读。5.说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断!